Adn Saliva 6d3x2a

1.1

EXTRACCIÓN DE ADN DE SALIVA En la saliva hay numerosas células, por tanto, es un buen material para obtener ADN.

Importante

Material y reactivos

Haz un esquema o resumen del procedimiento antes de realizar la práctica.

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Traga saliva antes de enjuagarte la boca para evitar que las enzimas de la saliva interfieran en el proceso. El alcohol tiene que estar frío, déjalo en la nevera el día anterior a la práctica o en un baño de hielo unas horas antes.

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Vaso de plástico transparente Pipetas de 5 y 10 mL Cuchara de plástico Aguja enmangada curvada Vaso de precipitados

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2

Tubo de ensayo Agua potable Disolución de lavavajillas al 25 % Disolución de sal común al 5 % Líquido limpiador para lentillas

Procedimiento Añadir por este orden:

1

1. 2. 3.

5 mL de solución salina. 5 mL de solución de lavavajillas. 3 mL de limpiador para lentillas

Agitar suavemente. Si se forma espuma retírala con una espátula. La función del detergente es romper la membrana plasmática y nuclear, también facilita la separación entre el ADN y las proteínas. La sal aporta iones y crea un medio hipertónico que contribuye a la ruptura de las cubiertas nucleares. El limpiador de lentillas es un proteolítico. Pon 20 mL de agua en un vaso de plástico (dos cucharadas) y enjuaga la boca con esta agua durante medio minuto. Devuelve el agua al vaso.

5

3

4 Añade 10 mL de alcohol frío sobre la muestra con mucho cuidado, dejándolo caer sobre las paredes del vaso de precipitados. Deben quedar dos fases separadas.

Deja reposar unos minutos, en la interfase se acumularán unos hilos blancos que son las hebras de ADN. El ADN precipita en la interfase alcohol-agua.

Introduce una aguja enmangada curva y muévela de un lado a otro en la zona de la interfase entre el alcohol y la muestra, las hebras de ADN se irán enrollando en la aguja. Pon algunas de las hebras en un porta y obsérvalas con el microscopio.

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Cuestiones y dibujos Lee detenidamente el procedimiento y completa la siguiente tabla:

Causa

Acción Detergente

Disolución salina

Rompe la membrana plasmática y nuclear. Facilita la separación entre ADN y proteínas

Crea un medio hipertónico, el agua se desplazará desde el núcleo al citoplasma y de este al medio externo, se romperá la membrana nuclear y la membrana plasmática, el ADN quedará libre. La sal aporta iones

Líquido limpia lentillas, Lisa las proteínas que contaminan el ADN, es un paso imprescindible, cuanto mejor se zumo de piña o haga mayor será la “calidad” del ADN ablandador de carnes obtenido.

Alcohol

Permite ver y recoger el ADN porque éste es insoluble en alcohol y precipita.

El detergente desorganiza la membrana al formar una emulsión con los lípidos.

Contenido muy alto de iones, los cationes Na+ se unirán a las cargas negativas del ADN.

Todos son proteolíticos

El ADN es soluble en agua pero insoluble en alcohol. La sal añadida con el tampón proporciona cationes Na+ que se unen a las cargas negativas del ADN provocando cambios fisicoquímicos en éste, su densidad disminuye y asciende hacia la interfase donde precipita.

Dibuja las hebras que has observado al microscopio.

En la fotografía pueden observarse las hebras de ADN en un tubo de ensayo con alcohol. Es importante recordar que el ADN no procede directamente de la saliva sino de las células del epitelio bucal que se desprenden y pasan a la saliva.

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