1. Manual De Practica Biologia 3n155a

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Biología General – Manual de Practicas de Laboratorio

Manual de prácticas de laboratorio

Biología General

Roger O. Poccohuanca Aguilar Pertenece al estudiante: Juliaca – Puno – Perú

2016

E.P INGENIERIA AMBIENTAL Y FORESTAL

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CONTENIDO INTRODUCCION .................................................................................................................................2 LINEAMIENTOS PARA LA ESTANCIA EN EL LABORATORIO .................................................................3 RECOMENDACIONES PARA LA ESTANCIA EN EL LABORATORIO ........................................................4 PRÁCTICA 1: EL MÉTODO CIENTÍFICO ...............................................................................................5 PRÁCTICA 2: MICROSCOPIA .........................................................................................................10 PRÁCTICA 3: OBSERVACION DE CELULAS VEGETALES .............................................................16 PRÁCTICA 4: OBSERVACION DE CELULAS ANIMALES ...............................................................22 PRÁCTICA 5: LA MEMBRANA Y EL TRANSPORTE CELULAR .....................................................26 PRÁCTICA 6: OBSERVACION DE LA MITOSIS EN LA RAIZ DE LA CEBOLLA .............................32 PRÁCTICA 7: SIMULACION DE PROCESOS DE REPLICACION DEL ADN Y SINTESIS DE PROTEINAS ....................................................................................................................................36


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INTRODUCCION Las

actividades

Biología,

pues

experimentales permiten

que

son

los

fundamentales

conocimientos

en

teóricos

asimilados por los estudiantes puedan consolidarse. El presente manual consta de 08 prácticas. En cada una de ellas ayudan

se al

inicia

fundamentándose

educando

a

relacionar

cuestiones

teóricas

y

interrogantes

aclarar

que

durante el proceso de la observación.


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LINEAMIENTOS PARA LA ESTANCIA EN EL LABORATORIO 1. Los estudiantes antes de entrar al laboratorio, deberán haber leído la guía de práctica correspondiente. Las instrucciones deben seguirse en forma inteligente, observándose todas las precauciones. 2. Para cada práctica, los estudiantes registran su asistencia en el ingreso al laboratorio. 3. Es obligatorio el uso de bata, que cubra hasta las rodillas y de mangas largas. La bata debe permanecer debidamente abotonada durante su estancia en laboratorio. 4. Está prohibido comer, ingerir bebidas, fumar, maquillarse, masticar chicles y golosinas dentro del laboratorio. 5. No se permite juegos o bromas. Las conversaciones dentro del laboratorio deben mantenerse en un tono de voz apropiado. 6. Cada equipo de trabajo debe asignar un responsable, quien debe solicitar los materiales a utilizar en las prácticas. El material utilizado deberá ser devuelto en perfecto estado y limpio. 7. Cualquier accidente que ocasione merma del equipo debe ser notificado inmediatamente al docente y/o al laboratorista; el responsable y/o el equipo firmaran un recibo a fin de comprometerse a reponerlo lo antes posible. 8. No están permitidas experimentos no establecidos en la guía de prácticas. 9. Los estudiantes deben mantener su mesa de trabajo y los espacios de trabajo ordenados y limpios. La guía de práctica, los equipos y/o materiales en uso son los únicos que deberán permanecer sobre la mesa de trabajo. Cada persona o grupo de personas son responsables de la zona de trabajo, los materiales y equipos asignados. 10. El reporte de cada práctica será visada, en los primeros 5 minutos de la siguiente práctica. 11. Cualquier infracción a las reglas que se establecen será sancionado en la calificación de la práctica.


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RECOMENDACIONES PARA LA ESTANCIA EN EL LABORATORIO 1. La asistencia a prácticas es obligatoria y de acuerdo al horario establecido, con una tolerancia de 10 minutos. No están permitidas las visitas dentro del laboratorio. 2. No asista al laboratorio con prendas o joyas (cadenas, pulseras, aretes largos, etc.). deberá presentarse con las uñas debidamente recortadas. Las damas deben asistir con el cabello recogido. 3. Los estudiantes deberán guardar respeto y disciplina en el laboratorio. El/la estudiante/a: .........................................., ha leído minuciosamente los lineamientos y las recomendaciones para la permanencia en el laboratorio y se compromete cumplirlas.

.................................. Nombre: Código de matrícula:


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PRÁCTICA 1: EL MÉTODO CIENTÍFICO I.

INTRODUCCION El método científico, es un instrumento de la ciencia adecuado que nos permite estructurar conocimientos. Es la herramienta que usan los científicos para encontrar las respuestas a sus interrogantes. El método científico es el modo ordenado de proceder para el conocimiento de la verdad, en el ámbito de determinada disciplina científica. En biología, la observación, la experimentación y la comparación son pasos indispensables del método de trabajo para estudiar a todos los seres vivos (Santillana 2002). El método científico comprende los siguientes pasos: 1. Observación. Es la parte inicial del trabajo científico y su finalidad es obtener datos del fenómeno en estudio. La observación está presente a lo largo de todo el método científico. Este paso consiste en hacer el análisis minucioso de un fenómeno por medio de los sentidos, y con la ayuda de algunos instrumentos y aparatos que amplían la capacidad de los órganos de los sentidos. Los más utilizados en biología son la lupa, el microscopio, la balanza, la regla y el termómetro. La observación va acompañada de un registro ordenado de la información, generalmente llamado recolección de datos 2. Planteamiento del problema. Una vez que se ejecuta la observación (la recolección de datos), la revisión bibliográfica (antecedentes de observaciones) surgen una o más preguntas generadas por la curiosidad del observador. ¿Liberan oxigeno las plantas en ausencia de luz? ¿Qué macrófito produce más oxigeno?

3. Formulación de una hipótesis. Una hipótesis es una respuesta posible para el problema planteado. Entonces, el observador trata de dar una o más respuestas lógicas a las preguntas. Cada respuesta es una introducción tentativa que puede servir como una guía para el resto de la investigación. La hipótesis es una declaración que puede ser falsa o verdadera, y que debe ser sometida a comprobación


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(experimentación). Los resultados de la experimentación determinaran el carácter final (falso o verdadero) de la hipótesis. Las plantas no producen oxígeno en ausencia de luz La Elodea produce más oxigeno que el Miriophyllum

4. Experimentación. La hipótesis se prueba por medio de la experimentación. Durante la experimentación se reproduce un fenómeno cuantas veces sea necesario para una mejor observación; también se cambian las condiciones que lo originan para ver las variaciones que se producen y así descubrir sus causas. El proceso experimental se inicia con la formulación de objetivos específicos que, sumados, permitan, a través de un experimento, confirmar o refutar la hipótesis. 5. Análisis de resultados y conclusiones. Es el proceso de comparar los resultados del experimento con la hipótesis para verificar si hay coherencia entre ellos. Si la hipótesis se confirma, entonces se incluye en el cuerpo de conocimientos disponibles; si se refuta, es necesario formularla de nuevo y volver a compararla. A partir de los resultados, se pueden sacar conclusiones. Un aspecto importante de la actividad científica es comunicar y divulgar al resto de la comunidad científica las conclusiones, de modo que sirvan como punto de partida para otros descubrimientos. Para ello se utilizan los medios de comunicación científicos (revistas, congresos, conferencias, etcétera). 6. Generalización. En algunos casos, la hipótesis comprobada en la experimentación pasa a la categoría de teoría o leyes. La teoría es una declaración parcial o totalmente verdadera, verificada por medio de la experimentación o de las evidencias y que sólo es válida para un tiempo y un lugar determinados. Si la teoría se verificara como verdadera en todo tiempo y lugar, entonces es considerada como Ley. Una teoría está sujeta a cambios, una ley es permanente e immutable. Una ley es comprobable en cualquier tiempo. Sin embargo, una teoría es verdadera sólo para un lugar y un tiempo. II. III.

OBJETIVOS Reconocer los pasos del método científico MATERIALES Y METODOLOGIA a. Materiales  Plastilina  Elodea


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         

Miriophyllum Soporte universal Pinzas de nueces 2 tapones con apertura 2 tubos de vidrio 2 pipetas graduadas 2 matraces Tijera Papel periódico Mangueras

b. Metodología 1. Echen agua en dos matraces hasta la mitad y coloquen dentro la Elodea o Miriophyllum. 2. Tapen cada matraz con un tapón atravesado previamente con una manguera de plástico, permitiendo que el tubo de plástico ingrese en el agua. el otro extremo de la manguera conecten al extremo inferior de una pipeta. La manguera debe tener 25 cm de longitud. 3. Coloquen las pipetas conectados en el soporte universal. Sellen las uniones entre pipeta y manguerilla y añadan en cada pipeta 10 ml de agua. 4. Sellen herméticamente con plastilina los bordes de los matraces junto con los tapones y manguerillas. 5. Expongan un matraz al sol y el otro matraz manténganlo en un espacio oscuro. 6. Observen el nivel del agua en las pipetas cada 50 minutos y anoten. 7. Realicen el mismo experimento, ahora utilizando dos macrófitos diferentes: Elodea y Miriophyllum

Fig. 01: Preparación (Cortesía de Santillana 2002).


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IV.


RESULTADOS Anoten los resultados en la siguiente tabla: OBSERVACIONES

NIVEL DE AGUA CON LUZ

NIVEL DE AGUA SIN LUZ

Inicio Ej. 8.40hr 10.20hr

Grafiquen sus resultados. Volumen de agua

Volumen de agua

10 mL

10 mL

Planta con presencia de luz

Planta en ausencia de luz

0

0 Tiempo

9:30

8:40

9:30

8:40

V.

Tiempo

DISCUSIONES ¿Qué sucede con el agua que hay dentro de la pipeta en el experimento con luz? .......................................................... .......................................................... .......................................................... ¿Por qué varia el nivel del agua en la pipeta? .......................................................... .......................................................... .......................................................... ¿A qué se debe la diferencia entre la cantidad de oxigeno liberado en presencia de luz y en ausencia de ella?


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.......................................................... .......................................................... .......................................................... ¿Sería recomendable colocar una planta en tu dormitorio? ¿Por qué? Investiguen. .......................................................... .......................................................... .......................................................... .......................................................... VI.

CONCLUSIONES Revisen la hipótesis planteada, contrástenla con las observaciones y redacten sus conclusiones. .......................................................... .......................................................... .......................................................... ..........................................................

VII.

BIBLIOGRAFIA Santillana S.A. 2011. Biología. Santillana S.A. 2002. Biología.


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PRÁCTICA 2: MICROSCOPIA I.

INTRODUCCION El microscopio es un aparato que aumenta considerablemente las imágenes de los objetos observados a través de él. Por medio del mismo ha sido posible estudiar la estructura “intima” de los seres vivos y advertir en ellos una organización microscópica que les es común. Un microscopio es un sistema de lentes que produce una imagen virtual aumentada de un pequeño objeto. El microscopio más simple es una lente convergente, la lupa. LENTES CONVERGENTES: Son aquellas cuyo espesor va disminuyendo del centro hacia los bordes. En este tipo de lentes, todo rayo que pase paralelamente al eje principal, al refractarse se junta en su foco. LENTES DIVERGENTES: Las lentes divergentes son más delgadas en el centro que

en los bordes.

El aparato más utilizado es el microscopio compuesto u óptico, éste consta de dos sistemas de lentes, uno de ellos amplía la imagen del objeto observado, que es captada y nuevamente ampliada por el segundo sistema, consiguiendo con esto un mayor poder de resolución. El poder de resolución es la capacidad para distinguir dos puntos muy próximos, de modo que puedan verse separados. El microscopio óptico consta de tres sistemas: el mecánico, el óptico y el de iluminación, cada uno de los cuales presentan una función y cuidados específicos. Al ser el microscopio un aparato de precisión, requiere que se maneje y cuide de manera muy especial y rigurosa.


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El aumento de los microscopios se refiere a la capacidad de sus lentes para incrementar el tamaño de la imagen del objeto observado. El aumento máximo de un microscopio óptico es de 1000 veces. La resolución de un microscopio, en cambio, se refiere a su capacidad de mostrar claramente los detalles del objeto. La resolución máxima del microscopio es de 0,2 micrómetros (0,0002mm). PARTES DE UN MICROSCOPIO COMPUESTO: OCULARES (A), REVOLVER (B), OBJETIVOS (C), PLATINA (D), Tornillos para desplazar la preparación sobre la platina en sentido longitudinal y transversal (E), CONDENSADOR (F), Tornillo MACROMÉTRICO (G), Tornillo MICROMÉTRICO (H), DIAFRAGMA IRIS (I), Tornillo para regular la altura del condensador (J), INTERRUPTOR (K), Regulador de la Intensidad de Luz (L), PINZAS para ajustar la preparación sobre la platina (M), PIE O BASE DEL MICROSCOPIO (N). http://www.uam.es/personal_pdi/ciencias/bolarios/BiologiaCCAA/Guiones/Practi ca3.htm

El aumento total se calcula con solo multiplicar aumento del objetivo (100X) por el ocular (10X). II.

III.

IV.

el

OBJETIVOS Identificar las partes y funcionamiento del microscopio óptico compuesto. MATERIALES a. Materiales  Microscopio compuesto  Laminillas portaobjetos  Laminillas cubreobjetos  Preparación fija  Muestra de agua estancada PROCEDIMIENTO: a. Reconocimiento del microscopio: 1. Sistema de soporte Pie o Base del Microscopio: es un dispositivo metálico pesado en forma cuadrada o circular, la función es dar estabilidad al microscopio y soporte a las demás partes que lo integran. Platina: Superficie plana de posición horizontal, con un orificio circular en el centro por donde pasa la luz. En la platina se apoya la preparación


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(lamina portaobjetos que contiene a la muestra que se va a examinar) que se sujeta a la platina mediante pinzas o con un carrito que, mediante mandos especiales facilita el movimiento de la preparación de derecha a izquierda y de adelante hacia atrás. Brazo: es el soporte que va desde la base hasta el sistema óptico. Permite la sujeción y traslado del microscopio y además soporta al sistema óptico, a la platina y el revolver. 2. Sistema óptico Oculares: Son lentes que se encuentran en el cabezal del microscopio. La denominación de ocular se debe a que el ojo del observador se coloca en este lente. Generalmente, los oculares están constituidos por dos lentes convergentes (planos convexos). Objetivos: Los objetivos están conformados por varias lentes (convergentes y divergentes); que se encuentran en la parte baja del cabezal, sujetos a un carrusel o revolver que permite el cambio de un objetivo a otro. Un objetivo amplia la imagen: secos débiles: 5X y 10X, seco fuerte 40X e inmersión 100X, este último solo se usa con aceite de inmersión y se le reconoce por llevar una banda o línea negra cerca al borde inferior. A estos lentes se les denomina objetivos porque se ubican cerca del objeto a observar. 3. Sistema de iluminación Fuente luminosa: es la luz proporcionada por un foco ubicado en la base del microscopio, dirige la luz hacia el condensador y esta última concentra la luz hacia el orificio circular de la platina proporcionando iluminación a la muestra. Condensador: Es un sistema de lentes con gran abertura, que se encuentra entre la platina y la fuente de iluminación. Su función es concentrar y regular los rayos luminosos que provienen de la fuente luminosa y los orienta hacia la abertura central de la platina. 4. Sistema de ajuste Tornillo macrométrico o de enfoque rápido: Generalmente están situados en la parte inferior del brazo o columna. Pueden estar separados (en los microscopios antiguos) o el tornillo micrométrico


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está incorporado en la circunferencia del tornillo macrométrico (microscopios actuales). Ambos tornillos permiten el desplazamiento de la platina hacia arriba y hacia abajo con la finalidad de acercar o alejar la preparación hacia los objetivos y así conseguir un enfoque óptimo de la imagen. INDIQUE LAS PARTES A:..................... B:..................... C:..................... D:..................... E:..................... F:..................... G:..................... H:..................... I:..................... J:..................... K:..................... L:.....................

Tornillo micrométrico o de ajuste fino: Su desplazamiento es mucho mas lento y permite enfocar claramente la imagen observada. Sirve para efectuar un enfoque fino y definitivo de la imagen Tornillo de carro móvil: Se utiliza para desplazar la lámina portaobjetos sobre la platina hacia los lados, hacia atrás y hacia delante. b. Preparación de láminas: 1. En un portaobjetos limpio y seco coloca una gota de agua estancada, cubre con el cubreobjetos y observa al microscopio, retira el exceso de agua con el papel filtro. 2. Observa primero con el objetivo seco débil (4X ó 10X) y por ultimo con el seco fuerte (40X). Para observar correctamente, debes tener la muestra a una distancia de aproximadamente de 1 cm. Ó 1.5 cm. del objetivo, enciende la fuente de luz del microscopio procurando que la muestra quede centrada en el rayo de luz que pasa por la platina. Posteriormente acerque lentamente la platina hacia el objetivo con el tornillo macrométrico, siempre observando a través de los oculares hasta que la imagen sea clara, y finalmente con el tornillo E.P INGENIERIA AMBIENTAL Y FORESTAL

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micrométrico enfoque mas finamente y aclarando mejor la imagen observado. En caso de no poder enfocar pida la ayuda de su maestro. ......................... ......................... ......................... ......................... ......................... Aumento ......X

3. Repite las operaciones con la muestra fija, cuando realices el cambio de objetivo no cambies la iluminación en forma inmediata, hasta que primero observes con la iluminación inicial. 4. Para utilizar el objetivo 100X, deberás tener ya identificado un campo de interés, realiza el procedimiento de enfoque para el objetivo 40X, gira el revolver para usar el objetivo 4X, sobre la preparación coloca una gota de aceite de inmersión gire el revolver para enfocar con el objetivo 100X y enfoca con el tornillo micrométrico. Siempre ten cuidado de no ejercer mucha presión del ocular sobre la preparación para evitar romperla. .......................... .......................... .......................... .......................... .......................... Aumento ......X

V.

..........................

CUESTIONARIO ¿Por qué es importante el uso del microscopio? ..........................................................


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.......................................................... .......................................................... ¿Cuáles son los sistemas que conforman a un microscopio? .......................................................... .......................................................... .......................................................... Explique sistema

la

función

de

cada

parte

que

conforma

cada

.......................................................... .......................................................... .......................................................... .......................................................... .......................................................... ¿Cómo se determina el número de veces que se aumenta una imagen del objeto que observamos? .......................................................... .......................................................... Resuma los cuidados fundamentales que se deben tener al manejar un microscopio .......................................................... .......................................................... VI.

BIBLIOGRAFIA Benis, M. 1998. Atlas de Microscopia. Segunda Edición. México D.F. Choquehuanca P., D, D. Alave V. y J. Velarde C. 2013. Guía de Trabajos prácticos de Biología Celular y Molecular. Universidad Nacional del Altiplano – Facultad de Ciencias Biológicas. Puno, Perú. 84 pp. Pedraza F., E. y E. Velasco T. ..... Manual de prácticas - Biología.


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PRÁCTICA 3: OBSERVACION DE CELULAS VEGETALES I.

INTRODUCCION La célula vegetal, además, de poseer casi los mismos organelos que la célula animal, presenta dos componentes esenciales (Constantino et al. 2012): a) una capa externa resistente, formada por celulosa, localizada por fuera de la membrana plasmática y se llama pared celular; esta capa tiene la función de dar resistencia y protección a la célula vegetal. b) los cloroplastos, que son organelos membranosos; estos contienen clorofila y llevan a cabo la función de la fotosíntesis. Las células vegetales también presentan otros tipos de plastos, los cromoplastos contienen diferentes tipos de pigmentos que dan color a las hojas, flores y frutos.

Fuente: http://www.simbiotica.org/imagens/celulavegetal.jpg


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II.

III.


OBJETIVOS Observar la morfología típica de las células vegetales Identificar las principales estructuras celulares y función dentro de la célula vegetal MATERIALES Y METODOLOGIA a. Materiales  Microscopio compuesto  3 Portaobjetos  3 Cubreobjetos  1 Gotero con chupón de jebe  1 palillo mondadiente  1 hoja de afeitar  1 estuche de disección  Cebolla  Hojas de Elodea y Spirogira  Jitomate fresco  Papa b. Reactivos  50ml de agua  5ml de lugol  5ml de azul de metileno  5 ml de glicerina  5 ml de verde de metilo acético c. Metodología i. Observación de la epidermis de la cebolla (lugol) Con la ayuda del bisturí u hoja de afeitar corte un fragmento de cebolla y desprenda la epidermis, que es la tela delgada y transparente de la superficie. Coloque una gota de lugol sobre el portaobjetos y sobre ella extienda la epidermis con ayuda del palillo mondadientes. Cubra la muestra y obsérvala al microscopio con el objetivo de 10X o 40X. ii. Observación de la epidermis de la cebolla (verde de metilo acético) Coloque en un portaobjetos, la epidermis desprendida de la cebolla y vierte unas gotas de verde de metilo acético y dejar actuar el colorante-fijador durante cinco minutos. No


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debe secarse la epidermis por falta de colorante o por evaporación del mismo. Con el cuentagotas bañe la epidermis con agua abundante hasta que no suelte colorante. Agregue unas gotas de glicerina a la preparación, coloque el cubre y observe al microscopio con el objetivo de 10X y 40X. La membrana celular celulósica se destaca muy clara teñida por el colorante. Los núcleos son grandes y muy visibles, en el interior de los mismos se puede llegar a percibir granulaciones, son los nucléolos. El citoplasma tiene aspecto bastante claro, en él se distinguen algunas vacuolas grandes débilmente coloreadas. En algunas ocasiones se observa que la preparación tiene a manera de mosaico otros estratos de células, estas proceden de las capas más internas de las hojas que fácilmente han podido ser arrancadas al desprender la epidermis. iii. Observación de cloroplastos Seleccione una hoja joven de Elodea, colócala sobre una gota de agua en una lámina portaobjetos. Cúbrela con una laminilla y observe al microscopio con objetivo de menor y mayor aumento. Coja un filamento de Spirogira y coloque en un portaobjetos, en la que previamente se ha colocado una gota de agua. Cúbrela con una laminilla cubreobjetos. Examine e identifique los cloroplastos en la muestra. iv. Observación de la epidermis del jitomate Corte un pequeño fragmento de jitomate y desprenda una porción delgada de epidermis. Coloque sobre otro portaobjetos; añade una gota de agua y cúbrela. Observa al microscopio con el objeto 10X o 40X.


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v. Observación de leucoplastos Sobre una lámina portaobjetos coloque una gota de lugol. Corta en dos una papa y raspa suavemente con el bisturí la superficie cortada. Deposítala en el portaobjetos el material del raspado y extiéndelo con cuidado sobre el lugol. Cúbrela con un cubreobjetos y observe al microscopio. Observe los leucoplastos teñidos de color muy oscuro o morado. Elabore un esquema de las estructuras observadas. IV.

RESULTADOS Esquematice sus observaciones señalando las partes celulares. i. Observación de la epidermis de la cebolla (lugol) .......................... .......................... .......................... Observaciones: las células de la epidermis de las hojas internas del bulbo de cebolla son de forma alargada y bastante grande. Aumento ......X

ii. Observación de la epidermis de la cebolla (verde de metilo acético) ......................... ......................... ......................... ......................... ......................... Aumento ......X


.........................

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iii. Observación de cloroplastos ......................... ......................... ......................... ......................... ......................... ......................... Aumento ......X iv. Observación de la epidermis del jitomate ......................... ......................... ......................... ......................... ......................... Aumento ......X v. Observación de leucoplastos ......................... ......................... ......................... ......................... ......................... ......................... Aumento ......X


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V. CUESTIONARIO Qué son plastidios ........................................................ ........................................................ ........................................................ ¿Cómo se clasifican los plastidios? ........................................................ ........................................................ ........................................................ ¿Qué

partes

de

la

célula

has

ubicado

en

la

elodea?

nómbralas ........................................................ ........................................................ ........................................................ VI.

BIBLIOGRAFIA Constantino C., E.R., M. Santiago R., A. D. Mesa M., V.H. Albores G. y A. Estrada S. 2012. Manual de prácticas de Biología I. Colegio de Estudios y Científicos y Tecnológicos del Estado de Chiapas. México.


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PRÁCTICA 4: OBSERVACION DE CELULAS ANIMALES I.

INTRODUCCION Una célula animal es un tipo de célula eucariótica de la que se componen muchos tejidos en los animales. La célula animal se diferencia de las células vegetales, en que carecen de pared celular y plastos. Debido a la ausencia de una pared celular rígida, las células animales pueden adoptar una gran variedad de formas.

La estructura de las células animales puede ser dividida en: la envoltura celular, constituida por la membrana celular o membrana plasmática; el citoplasma, en el que se hallan los orgánulos celulares y el núcleo celular. II.

III.

OBJETIVOS Distinguir animales.

las

principales

partes

en

células

MATERIALES Y METODOLOGIA a. Materiales  Microscopio compuesto  2 Portaobjetos


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         

2 Cubreobjetos 1 Gotero con chupón de jebe 1 palillo de madera Mechero bunsen Algodón con alcohol 1 estuche de disección 1 lanceta 1 puente de tinción Sangre humana Muestra de semen

b.

Reactivos  50ml de azul de metileno  Agua destilada  5ml de solución salina  Colorante Wright

c.

Metodología i. Observación de células del epitelio bucal Coloque una gota de agua destilada sobre la lámina portaobjetos. Realice un raspaje la cara interior de la boca Con palillo de madera Aplique una gota de colorante azul de metileno sobre la muestra, espere 3 minutos y retire el colorante en exceso no fijado a las células con gotas de agua destilada. Cubra la preparación con la laminilla cubreobjetos y observe con objetivo de 10X y 40X aumentos. Observe, dibuje e identifique las partes en el dibujo ii.

Observación de células sanguíneas Desinfectando la zona con gasa y alcohol, pinche con la lanceta el lateral del dedo medio. Obtenga una gota de sangre. Debe desechar la primera gota. Deposítala a 1cm del extremo de un porta objetos totalmente limpio y desengrasado (imagen A). Coloque otro portaobjetos formando un ángulo de 45° con el portaobjetos que contiene la muestra y se sitúa horizontalmente. Acercando el portaobjeto a la gota de sangre y al haberse extendido en toda la superficie del lateral (imagen B)


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Arrastre sobre la superficie del portaobjetos dispuesta en forma horizontal con decisión (imagen C). Deje secar a temperatura ambiente Tiña el frotis con colorante Wright durante 10 minutos. Agregue agua destilada hasta formar una capa tornasolada. Lave, examine con el objetivo de inmersión.

iii.

Observación de espermatozoides Obtenga una muestra de semen. Coloque en un portaobjetos una gota de semen y extiéndela sobre la laminilla. Fije la muestra y observe al microscopio con el objetivo de 10X y 40X

IV.

RESULTADOS Esquematice celulares.

sus

observaciones

señalando

las

partes

i. Observación de células del epitelio bucal .......................... .......................... .......................... .......................... .......................... .......................... Aumento ......X


..........................

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ii. Observación de los eritrocitos .......................... .......................... .......................... .......................... .......................... .......................... Aumento ......X

..........................

iii. Observación de espermatozoides ......................... ......................... ......................... ......................... ......................... ......................... Aumento ......X V.

CUESTIONARIO ¿Qué función tiene el núcleo en las células? ........................................................ ........................................................ ........................................................

VI.



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PRÁCTICA 5: LA MEMBRANA Y EL TRANSPORTE CELULAR VII.

INTRODUCCION Las membranas celulares son barreras selectivas que separan las células del medio externo. Su función mas importante es: Regular el transporte de moléculas que entran o salen de la célula o del organelo La membrana celular está formada por una capa doble de fosfolípidos. En ella insertadas se encuentran las proteínas, a ellas y los anteriores están asociadas moléculas de carbohidratos. Los fosfolípidos crean una barrera hidrofóbica entre los compartimientos acuosos de la célula. Las proteínas permiten el paso de moléculas hidrofílicas a través de la membrana.

Fuente: http://recursostic.educacion.es/ciencias/biosfera/web/alumno/1bachillerato/or ganizacion_sv/contenidos5.htm

Para que la célula funcione eficientemente, debe mantenerse en homeostasis. Para mantener este equilibrio existen mecanismos para el transporte selectivo de materiales hacia el interior o exterior de la célula. Las membranas de la célula son selectivamente permeables, permitiendo el paso de algunas sustancias o partículas (moléculas, átomos, o iones), e impidiendo el paso de otras. Esta selectividad se debe a la capa doble de fosfolípidos de la membrana. La manera en que las moléculas pasan por la membrana depende en parte de la polaridad de las


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mismas. Las moléculas hidrofóbicas, o no polares, pasan con relativa libertad a través de la capa de lípidos, mientras que moléculas hidrofílicas, o polares, incluyendo el agua, y las moléculas de mayor tamaño, pasan a través de canales formados por proteínas transportadoras. La regulación del transporte de las moléculas, o la dirección en que se mueven depende de su gradiente de concentración (diferencia en concentración entre dos lugares). Las moléculas se mueven constantemente debido a su energía cinética y se esparcen uniformemente en el espacio disponible. Este movimiento, llamado movimiento browniano, es la fuerza motriz de la difusión. Difusión se define como el movimiento natural de las partículas de un área de mayor concentración a un área de menor concentración hasta alcanzar un equilibrio dinámico, en el cual el movimiento neto de partículas es cero. La difusión no requiere gasto de energía por parte de la célula y por lo tanto es un movimiento pasivo. Cuando la célula transporta sustancias en contra de un gradiente de concentración (de un área de menor concentración a un área de mayor concentración) se requiere energía (ATP) y sucede movimiento activo. VIII.

OBJETIVOS Comprender los factores que afectan la velocidad de difusión. Entender la importancia de las soluciones hipotónicas, hipertónicas e isotónicas.

IX.

MATERIALES Y METODOLOGIA a. Materiales  Botellas con soluciones de sacarosa (0.1, 0.2,..., 0.6M)  Botella con sangre de vaca (mantener en nevera)  Elodea fresca  Agua destilada  Gradilla de tubos de ensayo  6 Tubos de ensayo pequeños  Goteros  Laminillas pota y cubreobjetos  Microscopio compuesto  Lápiz de cera  Dos vasos de 150 a 200 ml  Colorante  Una papa mediana o grande  hielo  Sacabocado


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    

Termómetro Navaja Balanza y papel para pesar 04 pipetas Pizetas

b. Metodología i. Difusión de moléculas de agua Añada agua a temperatura ambiente a un vaso y al otro añada agua fría. Deje los vasos reposar por 10 y 15 min para que no haya movimiento del agua. Añada cuidadosamente una gota de colorante a cada envase y observe la dispersión de la gota. ¿Afectó la temperatura la difusión del tinte? Explique tu observación. ii. Osmosis en células animales Cuando los eritrocitos (células rojas) se encuentran en un ambiente hipotónico el agua les entra por difusión y sucede hemólisis (el rompimiento de una célula roja). Cuando la célula roja está en un ambiente hipertónico pierde agua, se encoge y sucede crenación. En este experimento se observará el comportamiento de las células rojas de la sangre en soluciones hipotónicas e hipertónicas. Rotule tres tubos de ensayo: 0.1, 0.3, Y 0.6M. Añada soluciones de sacarosa de diferentes osmolaridades: Tubo 1: 3ml de solución de sacarosa 0.1M Tubo 1: 3ml de solución de sacarosa 0.3M Tubo 1: 3ml de solución de sacarosa 0.6M

Añada 3ml de sangre de vaca a cada observe la apariencia de la mezcla. Rotule y prepare cuatro laminillas:

tubo,

y

Laminilla 1: Gota de sangre de vaca, coloque el cubreobjeto y observe los eritrocitos Laminilla 2: Gota de la mezcla de tubo 1 (0.1M), coloque el cubreobjeto y observe bajo el microscopio y compare con la laminilla 1. Laminilla 3: Gota de la mezcla de tubo 2 (0.3M), coloque el cubreobjeto y observe bajo el microscopio y compare con la laminilla 1. Laminilla 4: Gota de la mezcla de tubo 3 (0.6M), coloque el cubreobjeto y observe bajo el microscopio y compare con la laminilla 1.


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¿Qué pasó a las células al entrar en o con cada una de las soluciones? ¿por qué? ¿Cuáles de las soluciones usadas fueron hipotónicas, hipertónicas e isotónicas para los eritrocitos? ¿En qué solución sucedió hemólisis de los eritrocitos y por qué? iii. Osmosis en células vegetales Rotule y prepare cuatro indica a continuación. Laminilla 1: Hoja agua de estanque. Laminilla 2: gota 0.1M y una hoja de Laminilla 3: gota 0.3M y una hoja de Laminilla 4: gota 0.6M y una hoja de

laminillas

según

se

de Elodea con una gota de

de la solución de sacarosa Elodea. de la solución de sacarosa Elodea. de la solución de sacarosa Elodea.

¿Qué le pasó a las células al entrar en o con cada una de las soluciones? ¿Cuáles de las soluciones usadas fueron hipotónicas, hipertónicas e isotónicas con respecto a las células? ¿Por qué ocurrió plasmólisis en una de las soluciones? ¿Por qué no ocurre lisis (rompimiento de la célula) en la célula vegetal? iv. Estimar la osmolaridad en las células vegetales En los siguientes ejercicios se observará cómo soluciones con diferentes molaridades afectan el equilibrio y el funcionamiento de las células vegetales. La osmolaridad se expresa como moles de soluto por litro de solución; mientras más alta es la osmolaridad, mayor es la concentración de soluto. Comparando la diferencia en el peso de las muestras de papa se determinará si las células adquieren o pierden agua en soluciones de diferentes molaridades y se determinará en qué osmolaridad las células vegetales se encuentran en homeostasis o equilibrio. Rotule seis vasos para solución de sacarosa (0.1 a 0.6M) y un vaso para agua destilada (0.0M). Añada 100 ml de la solución correspondiente a cada uno. E.P INGENIERIA AMBIENTAL Y FORESTAL

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Con el sacabocado obtenga siete cilindros de papa de aproximadamente 5cm de largo. Pese los cilindros de papa, anote en la Tabla 1.2 el peso inicial para cada uno. y transfiéralos inmediatamente a los vasos rotulados. Deje los cilindros en los vasos durante 2 horas. Saque los cilindros de los vasos y remueva el exceso de agua con papel toalla. Asegúrese de mantener separados los cilindros correspondientes a cada vaso. Anote si hubo cambios en textura y anote en la Tabla 1.2 el peso final de los cilindros. Con los datos de la Tabla 1.2, calcule el cambio en peso para cada cilindro y prepare una gráfica señalando los cambios en peso.

Tabla 1.2: Resultados del experimento Molaridades de la soluciones 0.0

0.1

0.2

0.3

0.4

0.5

0.6

Peso final (g) Peso inicial (g) Cambio en peso (%)

Grafiquen sus resultados. Volumen de agua 10 mL

s

m

o

l

a

r

0.2

0.3

0.4

0.5

0.6

0.0

0 o

0.1

Cambio en peso 0 (%)


i

d ad

30

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¿A qué molaridad de sacarosa se observa un cambio en la gráfica y a que molaridad no hay cambio? Explique el porqué. X.

XI.

RESULTADOS Esquematice sus observaciones cuestionario en hojas adicionales

y

conteste

el



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PRÁCTICA 6: OBSERVACION DE LA MITOSIS EN LA RAIZ DE LA CEBOLLA I.

INTRODUCCION La mitosis es el proceso de división celular que permite que surjan dos células hijas a partir de una célula madre y que tienen las mismas características que ésta. Mediante este proceso la conformación genética de la célula madre pasa a las células hijas sin modificación. Este proceso se presenta en organismos para reemplazar las células que se destruyen normalmente y para el crecimiento del organismo. El proceso fundamental de la mitosis es la autoduplicación del material genético seguida de una división celular. En general, aunque existen variaciones individuales del proceso mitótico, los estadios usuales de la mitosis son la interfase, la profase, la metafase, la anafase y la telofase o citocinesis.

Las raíces de las plantas crecen alargándose por su ápice, donde existen células meristemáticas que están en continua división. Por esta razón, la raíz de la cebolla un


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material excelente y fácil de conseguir para observar células en mitosis. La técnica consiste en aplastar el extremo terminal de una raicilla con el fin de separar sus células y teñirlas con un colorante para, así, poder visualizar los cromosomas al microscopio. II.

III.

OBJETIVOS Observar e identificar las distintas fases de la mitosis en células vegetales

MATERIALES Y METODOLOGIA a. Materiales  Un frasco de boca ancha con agua  Una cebolla  Un par de palillos (pueden ser mondadientes)  Carmín acético  Un mechero Bunsen  Una placa Petri  Una aguja de disección  Un microscopio  Tubo de prueba  Aguja de disección  Porta y cubre objetos b.

Metodología i. Preparación de la muestra Coloca la cebolla en el frasco, de tal manera que la parte inferior (disco) se halle en o con el agua. Para ello sostenla con los palillos. Coloca el frasco en un lugar sombreado y espera varios días para que crezcan las raíces Cuando las nuevas raíces tengan 2.5cm de longitud, corta 1cm del extremo de cada raíz. Coloca los trozos de las raíces en un tubo de ensayo con 2 cm3 de carmín acético. Calienta en el mechero hasta que se desprendan unos vapores tenues, evitando que entre en ebullición. Para ello debes retirar el tubo de la llama y apoyarlo encima del dorso de la mano. No debes notar sensación de quemadura. Echa el contenido del tubo de ensayo en la placa Petri Coge un trozo de la raíz, y colócala sobre el porta objetos y agrega unas gotas de carmín acético fresco.


33

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Con la ayuda de otro porta objetos, tritura el extremo de la raíz y luego coloca el cubreobjetos. Observa en el microscopio, primero con el objetivo de menor aumento y luego con el de mayor aumento. IV.

RESULTADOS Esquematice, si se ven, células en diferentes fases de la interfase o de la mitosis (profase, metafase, anafase y telofase) i. Observación de la epidermis de la cebolla (lugol) .......................... .......................... ..........................

Aumento ......X

.......................... .......................... ..........................

Aumento ......X

V.

CUESTIONARIO ¿Qué estructuras son las que se observan en la mitosis? ........................................................ ........................................................ ........................................................


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Describa cada una de las fases de la mitosis celular ........................................................ ........................................................ ........................................................ ........................................................ ........................................................ ........................................................ Explica mediante esquemas los cromosomas

la composición estructural de

........................................................ ........................................................

........................................................ ........................................................ ........................................................ VI.



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PRÁCTICA 7: SIMULACION DE PROCESOS DE REPLICACION DEL ADN Y SINTESIS DE PROTEINAS I.

INTRODUCCION

Al cabo de la división celular las células hijas heredan la misma información genética contenida en la célula progenitora. Como esa información se halla en el ADN, cada una de las moléculas de ADN debe generar otra molécula de ADN idéntica a la originaria para que ambas sean repartidas en las dos células hijas. Esta duplicación, merced a la cual el ADN se propaga en las células de generación en generación, se denomina replicación. La síntesis proteica tiene lugar en el ribosoma. En el ribosoma, el ARNm que es una secuencia de ribonucleótidos transcritos a partir del ADN, se traduce en una proteína, para lo cual se requiere también la intervención de los ARNt. El trabajo de los ARNt consiste en tomar a los aminoácidos de citosol y conducirlos al ribosoma. La síntesis de proteína comienza con la unión entre sí de dos aminoácidos y continúa con el agregado de nuevos aminoácidos.

Fig. 7. El codigo genetico con los 64 tripletes y los aminoacidos que especifican Cada triplete constituye un codón; existen en total 64 codones, 61 de los cuales sirven para cifrar aminoácidos y 3 para marcar el cese de la traducción.

II.

OBJETIVOS

Descubrir el proceso de la síntesis proteica.


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III.


MATERIALES Y METODOLOGIA a. Materiales    

Material codificado 500 fichas de 5 colores Cintas de 3 colores (4m) Cinta maskintape

b. Procedimiento Trabajando en procedimientos:

equipo,

realice

los

siguientes

i. Construyendo una molécula de ADN (en el núcleo) Construya una secuencia de 60 bases nitrogenadas (desoxirribonucleótidos). A la secuencia de bases añada la tira complementaria con otras 60 bases nitrogenadas.

DUPLICACION DE LA MOLECULA DE ADN ii. Duplicación del ADN (ocurre en el núcleo antes de la mitosis celular) Inicie la duplicación del ADN, separando las cadenas desde un extremo, y adicionando del medio los nucleótidos complementarios a cada uno de los bases de la tira del ADN que sirve como plantilla para la replicación Siga con el procedimiento hasta separar las dos cadenas iniciales del ADN. Verifique si las dos tiras complementarias son idénticas y a la original. En una división celular un DNA debe destinarse para integrar parte de una célula hija y la otra parte de la otra célula hija. En los siguientes ejercicios, tiene que completar las dos cadenas que se han separado con los respectivos nucleótidos formando dos nuevas moléculas de ADN idénticas a la original.


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Biología General – Manual de Practicas de Laboratorio Etapa inicial de la replicación del ADN

A

T

T

C

C

C

A

A

A

T

G

G

G

C

T

T

T

A

A

G

G

G

T

T

T

A

C

C

C

G

A

A

Etapa intermedia

A

C

G

T

T

G

C

A

A

C

G

T

G

C

A

A

T

G

G

G

C

T

T

T

A

C

G

T

T

A

C

C

C

G

A

A

A

T

G

C

A C A

T

T

C

C

T

A

A

G

G G T

Etapa final de la replicación C

C

C

A

A

A

T

G

G

G

C

T

T

T

A

C

G

G

G

G

T

T

T

A

C

C

C

G

A

A

A

T

G

C

T T A T A A

SINTESIS DE PROTEINAS

iii. Transcripción de ADN en el núcleo celular En el núcleo celular

Recibe el nombre de transcripción la síntesis de moléculas de ARN sobre la base de moldes de ADN

Inicien la transcripción construyendo a partir de un molde de ADN (de la secuencia de 60 nucleótidos construidos al inicio de la practica) y ribonucleótidos libres, siguiendo estos cinco pasos:


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Biología General – Manual de Practicas de Laboratorio Primero, separe una porción de las moléculas de ADN (los 60 desoxirribonucleotidos). Utilice fichas de colores diferentes. Segundo, los ribonucleótidos se aparearían con desoxirribonucleótidos complementarios del ADN todos simultáneamente. sustituyendo uracilo por timina. Tercero, cada ribonucleotido se uniría con sus dos vecinos. Cuarto, los ribonucleótidos se separan de los desoxirribonucleótidos del ADN y se liberaría la molécula de ARN. Quinto, las dos cadenas de ADN volverían a unirse. A

A

T

G

G

G

C

T

T

T

A

A C A

T

T

C

C

T

A

A

G

G

ARNm A

U

G

G

G

C

U

U

U

A

T

A

C

C

C

G

A

A

A

T

G T T

iv. La traducción del ARN – síntesis de proteínas

La síntesis proteica tiene lugar en el ribosoma. En el ribosoma, el ARNm se traduce en una proteína, para lo cual se requiere también la intervención de los ARNt. El trabajo de los ARNt consiste en tomar a los aminoácidos de citosol y conducirlos al ribosoma. La síntesis de proteína comienza con la unión entre sí de dos aminoácidos y continua con el agregado de nuevos aminoácidos. La síntesis de proteínas se divide en tres etapas, llamadas de iniciación, de alargamiento y de terminación.

Inicien la traducción del ARNm obtenido del proceso de transcripción en el procedimiento IV. Hagan acoplar los tripletes de ARNt (anticodones) a los codones del ARNm y construyan la secuencia de aminoácidos correspondientes para la información genética, utilizando para cada codón la información contenida en la figura 7. Al finalizar la lectura de cada triplete (codones) obtendrán la secuencia de aminoácidos del polipéptido. Así concluye la síntesis de proteínas en los ribosomas.


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IV.


RESULTADOS

Registre la secuencia de los 60 desoxirribonucleótidos, que construyó como condición previa para el inicio de la práctica. .

.

.

T

A

C

A

C

T

.

.

.

A la secuencia de los 60 desoxirribonucleótidos, añada la tira complementaria .

.

.

T

A

C

A

C

T

.

.

.

Esquematice la secuencia de ribonucleótidos que obtuvo del proceso de transcripción (ARNm). A

U

G

U

Esquematice la secuencia de proceso de traducción del ARNm


G

aminoácidos

A

que

obtuvo

del

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Proteína

V.

CUESTIONARIO Identifica la secuencia de aminoácidos correspondientes al siguiente fragmento de ADN TATCCGATGCAAACCGAATACCCGGGGCGGAATGGCCAGATATGGTATTATCACC CGGGGCGGAATGGCCAGATATGGTATTATC

¿Qué entiende por replicación y traducción? …………………………………………………………………………………………………………………………………………………. …………………………………………………………………………………………………………………………………………………. …………………………………………………………………………………………………………………………………………………. …………………………………………………………………………………………………………………………………………………. VI.

BIBLIOGRAFIA Robertis J.H. 2001. Fundamentos de Biología Celular y Molecular. 4ta. Edición. Editorial el Ateneo. Buenos Aires, Argentina. 442 pp.


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